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服务简介
稳定细胞株构建是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素、潮霉素和嘌呤霉素,常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。稳定细胞株的构建周期长、难度大,每一步都很关键,尤其是细胞转染,常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒),根据不同的实验条件,选择方法,来达到实验目的。
稳定细胞株构建的基本原理是用基因导入工具或基因编辑工具,改造原始细胞基因组,使改造后的细胞具有某些特定表型,并经过抗性筛选或其他筛选方法,使其表型能长期传代稳转。
百欧泰建立了一套成熟稳定的细胞体系构建系统,可针对多种不同细胞(包括难转染细胞)为您提供生产型稳定细胞株的构建服务。具备成熟的细胞实验服务平台,服务内容丰富详细。同时还可为客户提供包括过表达、沉默稳转细胞系构建等多种技术服务。我们能够按照客户的要求完成目的生产型细胞系的构建和测试。
服务步骤
应用范围
1 药物研发
2 开发靶向于癌症干细胞的治疗性药物
细胞转染
1 阳离子脂质体转染法
特点:操作简便、适用于各种裸露的DNA和RNA片段、适合转染各种的细胞、对DNA浓度有一定要求、对细胞有一定的毒性。瞬时转染、稳定转染均可
2 电穿孔法
特点:适用性广,适用于质粒和几十kb的基因组片段、针对不同细胞要优化实验条件、细胞致死率较高。瞬时转染、稳定转染均可
3 逆转录病毒转染
特点:转染效率高,适用于难转染细胞转染、利用病毒介导转染,外源基因整合较稳定、逆转录病毒只选择感染分裂细胞、容纳外源基因长度<8kb。稳定转染特定细胞
4 腺病毒转染
特点:可用于难转染的细胞,需考虑安全因素。瞬时转染、稳定转染均可
5 磷酸钙法
特点:不适用于原代细胞、所需的DNA浓度较高、操作简便但重复性差。瞬时转染、稳定转染均可
6 显微注射法
特点:转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞。瞬时转染、稳定转染均可
服务优势
百欧泰团队具有丰富的细胞系构建经验,可提供多种服务优势:
l 保证极高的成功率与快速交付速度;
l 服务为主:价格合理,可根据客户需求综合分析,为客户提供满意的结果;
l 专业的技术支持,保障强力、周到及时的售前售后服务支持,随时为您解答出现的任何问题;
l 完整的上下游服务:具备完善的细胞、抗体、蛋白等服务平台,一站式技术服务,节约客户宝贵时间和经费。
l 多种不同启动子和标签的慢病毒表达载体可供选择;
l 细胞来源清晰,质量有保证:无细菌、真菌和支原体污染;
服务流程
双方沟通一致后确定实验方案,确定服务要求-签订合同—预付款-开始实验-成果交付
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