蛋白组学服务

百欧泰生物建立了蛋白分析技术平台，可以对各种蛋白质进行测序。技术人员可以对各种蛋白质进行解析，得到其图谱，并利用拼接软件得到未知序列。常用的蛋白质测序方法是质谱分析和Edman降解法，客户可以在2-4周左右得到蛋白的全长序列。此外，我们可以为客户提供肽段覆盖率检测服务和蛋白质定量服务，肽段覆盖率检测可以利用酶切鉴定、Orbitrap LC-MS/MS样品分析、数据比对，确认蛋白质的序列一致性程度；蛋白质定量服务包括标记定量技术（，iTRAQ/TMT技术）和非标记定量技术，可用于研究不同条件下或者不同阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。

N端测序-Edman降解法                          

该方法主要用于顺序分析。它的原理是从N端开始，逐步降解。将肽先与PTH试剂在pH8-9条件下作用，肽的NH₂末端接到异硫qin酸苯酯的C原子上生成苯异硫X甲氨酰肽，简称PTC肽，在强酸作用下，可使靠近PTC基的氨基酸环化，肽键断裂形成苯氨基噻唑啉酮衍生物和一个失去末端氨基酸的肽链。此肽不被破坏，因而又可出现一个新的N-末端。重复以上的步骤，继续与PTH试剂作用，继续分析，苯氨基噻唑啉酮衍生物很容易由有机溶剂抽提出来进行鉴定。 Edman降解法的优点是样品用量少，灵敏度高。

实验要求：蛋白N端测序，要求纯度很高的蛋白，可通过SDS-page胶考染判定。如果蛋白是复合物，可以通过跑SDS-PAGE胶分离蛋白，再PVDF转膜，考染染膜。提供PVDF膜进行测序，将通过剪切特异的PVDF膜染色条带进行测序。

N端测序-质谱分析

在基于MS的测序中，蛋白质被消化酶预处理消化成小片段，然后用质谱仪分析。由于大多数氨基酸残基的质量不同，不同的肽段可以产生有不同m/z和不同谱图的碎片离子。质谱法可以用于N端测序和C端测序。该方法优点：能获取更长的N端序列信息；可分析N端封闭和PTMs。MS测序可以通过高分辨率质谱分析N端封闭和翻译后修饰(PTMs)，可通过使用两种或三种不同蛋白酶的组合来增加序列的覆盖率。

实验要求：凝胶和液体蛋白样品均可以接受，样品纯度应尽可能高。质谱分析是一项非常灵敏的技术，因此样品必须仔细准备，应消除任何可能引入污染蛋白质的来源。

iTRAQ/TMT            

iTRAQ和TMT都是等重同位素标签，这两种标签标记肽段的原理是一样的，因此使用iTRAQ和TMT标签定量蛋白是属于同一类定量方法。iTRAQ标签与TMT标签都由报告基团、平衡基团以及肽反应基团组成，报告基团和平衡基团通过加入同位素分子的量和种类来调节重量，每种标签的报告基团和平衡基团的总重量是一定的，这就构成了等重标签。

适用范围：可检测到的蛋白除了胞浆蛋白外，还有线粒体蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量，酸性，碱性蛋白质，可以实现多个样品的定性定量分析，特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析。

蛋白质非标记定量            

蛋白质非标记定量技术（label-free）是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，不需要稳定同位素标记样本，每个样本分别上机检测。由于不需要对样本进行标记，蛋白非标记定量分析技术成本较低，并且对一次检测的样本量无限制，可同时比较多个样本的蛋白质表达差异。

适用范围：不同处理、不同生理/病理状态下样本中的蛋白质表达变化；蛋白DIA定量技术特别适合大样本量的蛋白质研究。

肽段覆盖率检测

序列覆盖率是指通过LC-MS确证蛋白质氨基酸序列和理论序列的一致性匹配程度，主要是针对蛋白序列的确认。百欧泰生物在蛋白鉴定过程中一般会使用两种不同的酶（如trypsin和chymotrypsin）对靶蛋白进行酶切和鉴定，结合 LC-MS/MS对酶解产物进行质谱分析，以达到较高的覆盖率。我们采用的蛋白分子识别系统具有较高的识别率，也大大缩短了分析周期。

实验要求：蛋白样品量>50μg，纯度>85%

服务优势

制定个性化的实验方案

高通量定性定量能力

检测项目的覆盖范围广

专业的检测及分析能力

严格的质量控制体系